Мишень miR-410/Wnt-11 регулирует костообразование и ингибирует остеокласты для лечения асептического некроса головки бедренной кости

Аннотация

Цель

Функциональная роль микроРНК-410 (miR-410) в асептическом некрозе головки бедренной кости (АНГБК) мало изучена. Цель работы — исследовать мишень miR-410/Wnt-11 для модуляции остеогенетического и остеокластического механизмов профилактики АНГБК.

Методы

Собрано 15 образцов тканей при АНГБК и 15 нормальных образцов. Наблюдались патофизиологические изменения головки бедренной кости, остеобластов и остеокластов. На крысиной модели АНГБК вводили agomir-miR-410, Wnt-11-siRNA или оэ-Wnt-11. Определяли экспрессию miR-410, Wnt-11; остеобластных факторов (ALP, BGLAP, Collα1); остеокластных факторов (ACP5, CTSK, MMP9), а также Bcl-2 и Bax методами RT-qPCR и вестерн-блот. Остеогенетические индексы (ALP, OCN) и остеокластические (NTX-1, CTX-1) в сыворотке измеряли ЭЛИСА.

Результаты

В тканях при АНГБК снижены miR-410, ALP, BGLAP, Collα1, а повышены Wnt-11, ACP5, CTSK, MMP9. Урегулирование miR-410 и даунрегуляция Wnt-11 у крыс повышали минеральную плотность кости (BMD) и BV/TV, BMD диафиза бедра, головки бедра и позвоночника, уровни кальция и фосфора в сыворотке, подавляли а폽тоз остеоцитов, повышали экспрессию OCN, ALP, BGLAP, Collα1 и снижали ACP5, CTSK, NTX-1, CTX-1, MMP9.

Заключение

Урегулирование miR-410 или даунрегуляция Wnt-11 увеличивают остеобласты и уменьшают остеокласты, смягчая АНГБК. miR-410 может стать потенциальной мишенью для лечения АНГБК.

Введение

Асептический некроз головки бедренной кости (АНГБК) — одно из самых распространенных заболеваний тазобедренного сустава, вызывающее сильную боль или инвалидность, преимущественно у лиц среднего возраста [1]. Лечение взрослых пациентов (8,12 млн в Китае) остается вызовом для хирургов [2]. Факторы риска: гиперлипидемия, аутоиммунные заболевания, нарушения свертываемости, алкоголизм, гиперкортицизм [3]. Хирургическое лечение включает коревую декомпрессию с адъювантами (аутологичный костный мозг), а тотальная эндопротезировка (ТЭП) зарезервирована для пожилых или запущенных случаев [4]. Однако прогноз при АНГБК часто неудовлетворителен, часто требуя ТЭП [5]. Срочно нужно точное терапевтическое мишень.

МикроРНК (miRNA) — главные регуляторы клеточной функции и генной экспрессии, влияющие на эндотелиальную гомеостаз, и могут стать новым лечением [6]. miR-410 аномально экспрессируется в нескольких злокачественных опухолях и действует как супрессор в раке эндометрия, легких, миеломе, молочной железы [7–10]. miR-410 нейропротекторен в модели Паркинсона, индуцированной 6-гидроксидопамином, через подавление PTEN/AKT/mTOR [11]. miR-410 модулирует злокачественность острой лимфобластической лейкемии у детей через FKBP5 и AKT [12]. Показано ингибирующее действие miR-410, мишенирующего ангиотензин II тип 1, в раке поджелудочной железы [13]. Wnt-белки — цистеин-богатые секретируемые липогликопротеины, важные в развитии и болезнях [14]. Wnt-11 принадлежит Wnt-пути и является позитивным регулятором, играющим ключевую роль в канцерогенезе [15]. О клиническом значении экспрессии антигена плоскоклеточной карциномы и Wnt11 при шейном раке сообщалось [16]. TGF-β1 и Wnt11 синергически индуцируют sm-α-актин в гладких мышцах через Rho-киназу-актин-MRTF-A [17]. Цель работы — изучить роль miR-410, регулирующей Wnt-11, в профилактике АНГБК. Гипотеза: miR-410, мишенирующий Wnt-11, модулирует остеогенетические и остеокластические механизмы профилактики АНГБК.

Материалы и методы

Этическое заявление

Исследование одобрено Этический комитетом Пекинской больницы Шижитань, Медицинский университет столицы, соответствует Декларации Хельсинки. Участники дали информированное согласие. Эксперименты на животных согласованы с руководством NIH и разрешены Комитетом по этике животных экспериментов той же больницы.

Объекты исследования

Отобрано 30 пациентов ортопедического отделения Пекинской больницы Шижитань (январь 2017 – сентябрь 2018). 15 пациентов с АНГБК (группа АНГБК): медианный возраст 50,6±4,3 лет, масса 57,0±5,6 кг, 7 мужчин, 8 женщин. 15 пациентов с переломом шейки бедра (контроль): возраст 59,6±3,3 лет, масса 50,0±5,6 кг, 9 мужчин, 6 женщин. Группы сопоставимы по полу, возрасту, весу (P>0,05). Ткани из подхрящевого некротического участка изымали долблением вдоль продольной линии головки бедра и хранили при -80°C. Каждая группа исследовалась патологически и молекулярно-биологически.

Гемоксилин-эозиновое (ГЭ) окрашивание

Образцы фиксировали 4% параформальдегидом, декальцинировали 10% ЭДТА (раствор меняли еженедельно). После полной декальцинации — парафиновые срезы 4 мкм. Стандартная про토чная с ксилолом, спиртами, гемоксилином (3 мин), дифференцировка 1% соляной кислотой в спирте (2 мин), эозином (5 сек), дегидратация, запечатление нейтральной каучуковой смолой. Микроскопия.

Щелочная фосфатаза (ALP) окрашивание

Срезы развoskивали ксилолом (2×15 мин), спиртами, промывали водой. Нанесали субстрат из набора ALP (Наньцзин Цзяньчэн), инкубация 37°C, 15 мин, в темноте. Хромогенные реагенты А (5 мин) и В (30 сек), контрастный реагент (30 сек). Фото при 200×, подсчет остеобластов системой Image-Pro Plus 6.0.

Тартрато-устойчивая кислая фосфатаза (TRAP) окрашивание

Аналогичная развoskивание, фиксация 30 сек. Инкубация в свежеприготовленном TRAP-растворе (Sigma) 37°C, 1 ч. Контраст гемоксилином 2 мин. Без запечатления (TRAP выцветает). Фото 200×, подсчет остеокластов Image-Pro Plus 6.0.

Иммуногистохимическое окрашивание

После декальцинации — парафин, срезы 4 мкм. Развoskивание, градиентные спирты, 3% H₂O₂ (7°C, 30 мин), антигенный ретриев 0,01 М лимонной кислотой (95°C, 20 мин). Блокировка нормальной овечьей сывороткой (10 мин). Первичное антитело Wnt-11 (1:100, Invitrogen) 4°C overnight. Вторичное антитело (PV-6000, ZSGB-Bio) 20 мин. Стриддиновая переоксидаза (S-A/HRP, Beijing ComWin) 2 мин. Развитие ДАБ (Sigma), контраст гемоксилином, запечатление. PBS вместо первичного антитела — негативный контроль. Оценка двух слепых экспертов: отрицательно (<5% положительных), слабо положительно (5–24%), положительно (25–50%), сильно положительно (>50%).

RT-qPCR

Общий РНК — Тризол (Invitrogen). Концентрация и чистота. Праймеры — Takara Bio (Otsu, Japan) (Доп. файл 1: Таблица S1). Обратная транскрипция — PrimeScript RT kit (Takara). qPCR — SYBR Premix Ex Taq II (Takara) на ABI PRISM 7300. U6 — контроль загрузки miR-410, GAPDH — внутренний стандарт для Wnt-11, ALP, BGLAP, Collα1, ACP5, CTSK, MMP9, Bcl-2, Bax. Относительные уровни — метод 2^(-ΔΔCt) [18].

Вестерн-блот

Общий белок из тканей головки бедра. Концентрация — Bradford. SDS-PAGE 10%. Перенос на нитроцеллюлозу. Блокировка 5% обезжиренного молока 4°C overnight. Первичные антитела: Wnt-11 (1:150, Santa Cruz), ALP (1:100, Sigma), BGLAP, Collα1, MMP9 (1:1000), ACP5 (1:100), CTSK (1:500, Abcam), Bcl-2, Bax (1:500, Proteintech) overnight. Вторичное IgG-HRP (1:1000, Wuhan Boster) 1 ч. ЭХС (Pierce), анализ ImageJ2x. GAPDH — внутренний контроль.

Создание крысиной модели АНГБК

90 самцов SD (Shanghai SLAC), 300–350 г. Условия: 18–25°C, влажность 45–70%, отдельные клетки. Неделя адаптации. Травматическая модель: наркоз, удаление шерсти, разрез, перебор тканей, перебор круглой связки, скрапывание надкостницы шейки бедра, разрушение кровоснабжения головки. Слой за слоем швы, стерилизация.

Группировка животных

70 успешных крыс распределены на 7 групп по 10: группа АНГБК; agomir-NC (0,5 мл miR-410 агонист NC, 200 нМ, Guangzhou RiboBio, через неделю после моделирования); agomir-miR-410 (0,5 мл miR-410 агонист); siRNA-NC (0,4 мл NC силенсинга Wnt-11, 1×10⁹ PFU, Shanghai GenePharma); Wnt-11-siRNA (0,4 мл siRNA Wnt-11); agomir-miR-410 + OE-NC (0,5 мл miR-410 агонист + 0,4 мл NC оэ-Wnt-11); agomir-miR-410 + OE-Wnt-11 (0,5 мл miR-410 агонист + 0,4 мл оэ-Wnt-11). Нормальная группа (физраствор, 10 крыс) — контроль. Через 4 недели: микро-КТ, остеометрия, рентген, денситомерия, кальций/фосфор в сыворотке.

Микро-КТ и остеометрия

Правая головка бедра на микро-КТ (GE). Разрешение 27 мкм, ток 450 мА, напряжение 80 кВ, время 88 мин. 3 кубоидных ROI (0,5³ см³) для реконструкции. Софт GE MicroView. Параметры: BMD, BV/TV.

Рентген, BMD, кальций/фосфор в сыворотке

Через 4 недели: 10% хлоралгидрат i.p., рентген в положении на спине. BMD левого бедра, головки, позвоночника — двухучевой рентгеновский денситометр. Натощак 12 ч, кровь 5 мл из сердца, вакуумная пробирка, центрифуга 3000 об/мин 15 мин. Кальций/фосфор — автоматический биохимический анализатор.

Электронная микроскопия

Костная ткань: 3,5% глютаральдегид, декальцинация 5% HCl + 1% OsO₄, дегидратация ацетоном, двойное окрашивание уранила ацетат/лимонная кислота, встраивание Epon-61. Полутонкие срезы, ультратонкие — передаточная электронная микроскопия.

TUNEL-апоптоз

Парафиновые срезы: развoskивание, дегидратация. Пепсин (0,25–0,5% HCl) 25 мин. TUNEL-реактив 50 мкл, влажная камера 60 мин. Пероксидаза-агент 50 мкл, 30 мин. ДАБ, микроскоп. Остановка водой, гемоксилин 2 мин, дегидратация, запечатление. Анализ световой микроскопии.

ЭЛИСА

Кровь бедренной артерии после анестезии, сыворотка после 1 ч покоя, центрифуга. По протоколу набора (Shanghai Enzyme-linked Biotech): 7 стандартных колодцев с разными концентрациями, пустые — растворитель, остальные — образец 100 мкл. Инкубация 1 ч, отмывка, реагент А 100 мкл, 1 ч, отмывка, реагент В 100 мкл, 30 мин, субстрат ТМБ 90 мкл, 10–20 мин, стоп-раствор 50 мкл. OD на фототметре, расчет концентрации.

Двойной люциферазный репортерный анализ

Сайты связи miR-410 и 3'-UTR Wnt-11 предсказаны на targetscan.org. Wnt-11 3'UTR с сайтом вставлен в pMIR-REPORT Luciferase (Ambion) — Wnt-11-WT. Мутант Wnt-11-MUT по мутированному сайту. Плазмиды извлечены (Promega). 293T клетки в 96-колодцевых пластинках, 70% конфлюэнтность, Липофектамин 2000. Ко-транфекция Wnt-11-WT/MUT с mimics NC/miR-410 mimics (GenePharma). 48 ч — лизис, люцифераза (BioVision), люминометр Glomax 20/20 (Promega).

Статистический анализ

SPSS 21.0. Данные — среднее ± SD. Многогрупповые сравнения — однофакторный ANOVA, двухгрупповые — t-тест, пост-хок LSD-t после ANOVA. P<0,05 — значимо.

Результаты

Патофизиологические изменения в тканях при АНГБК (клинические образцы)

ГЭ-окрашивание: контроль — костные трабекулы плотные, структура цельная. Группа АНГБК — множественные пустые костные лунки, уменьшение остеоцитов, непрерывное изменение трабекул, гиперплазия тканей вокруг мозжечка (рис. 1а).

TRAP: в контроле — мало TRAP+ остеокластов. При АНГБК — увеличение TRAP+ остеокластов, полиморфная морфология, крупные многозядерные клетки, явные дефекты кости рядом с остеокластами — ресорбция (рис. 1б).

ALP: в контроле — много ALP+ остеобластов (коричневые зерна в цитоплазме). При АНГБК — уменьшение ALP+ остеобластов (рис. 1в).

Снижение miR-410, ALP, BGLAP, Collα1 и повышение Wnt-11, ACP5, CTSK, MMP9 в тканях при АНГБК

Вестерн-блот и RT-qPCR: в группе АНГБК miR-410 снижен, Wnt-11 повышен; остеобластные факторы ALP, BGLAP, Collα1 снижены; остеокластные ACP5, CTSK, MMP9 повышены (все P<0,05) (рис. 2а–в).

Иммуногистохимия: Wnt-11 в цитоплазме, коричнево-желтое окрашивание. При АНГБК положительная экспрессия Wnt-11 повышена (P<0,05) (рис. 2г).

Урегулирование miR-410 и даунрегуляция Wnt-11 повышают BMD и BV/TV крыс

Микро-КТ: норма — головка круглая, шейка однородная, трабекулы непрерывны. Группы АНГБК, agomir-NC, siRNA-NC, agomir-miR-410+OE-Wnt-11 — головка коллапсирует, ресорбция, утончение шейки, разрыв трабекул. Группы agomir-miR-410, Wnt-11-siRNA, agomir-miR-410+OE-NC — головка цельная, трабекулы нормальны (рис. 3а).

Остеометрия: относительно нормы BMD и BV/TV снижены в группе АНГБК (P<0,05). Относительно agomir-NC и siRNA-NC — BMD и BV/TV повышены в agomir-miR-410 и Wnt-11-siRNA (P<0,05). Относительно agomir-miR-410+OE-NC — снижены в agomir-miR-410+OE-Wnt-11 (P<0,05) (рис. 3б, в).

Урегулирование miR-410 и низкая экспрессия Wnt-11 повышают BMD диафиза, головки, позвоночника и кальций/фосфор в сыворотке

Рентген: норма — головка круглая, плотность однородная. Группы АНГБК, agomir-NC, siRNA-NC, agomir-miR-410+OE-Wnt-11 — утончение, ресорбция. Группы agomir-miR-410, Wnt-11-siRNA, agomir-miR-410+OE-NC — головка ровная, толщина нормальна (рис. 4а).

BMD и кальций/фосфор: относительно нормы — снижение в группе АНГБК (P<0,05). Относительно agomir-NC и siRNA-NC — повышение в agomir-miR-410 и Wnt-11-siRNA (P<0,05). Относительно agomir-miR-410+OE-NC — снижение в agomir-miR-410+OE-Wnt-11 (P<0,05) (рис. 4б, в).

Силенсинг Wnt-11 и урегулирование miR-410 смягчают патофизиологию и подавляют а폽тоз остеоцитов

ГЭ: норма — трабекулы аккуратные, остеоциты заполняют лунки. Группы АНГБК, agomir-NC, siRNA-NC, agomir-miR-410+OE-Wnt-11 — трабекулы редкие, тонкие, разорванные, структура беспорядочная, некроз остеоцитов, пустые лунки, грануляционная ткань. Группы agomir-miR-410, Wnt-11-siRNA, agomir-miR-410+OE-NC — структура цельная (рис. 5а).

Электронная микроскопия: норма — остеобласты нормальной морфологии, органиеллы богаты. Группы АНГБК, agomir-NC, siRNA-NC, agomir-miR-410+OE-Wnt-11 — липидные включения в остеобластах, расширение зазора капсула-лунка, отеки, маргинация хроматина, отек митохондрий, исчезновение ЭПС и Гольджи. Группы agomir-miR-410, Wnt-11-siRNA, agomir-miR-410+OE-NC — нормальная морфология, единичные агрегаты хроматина, нет липидных капель (рис. 5б).

TUNEL: а폽тоз остеоцитов повышен в группе АНГБК vs норма (P<0,05). В agomir-miR-410 и Wnt-11-siRNA vs agomir-NC и siRNA-NC — снижен (P<0,05). В agomir-miR-410+OE-Wnt-11 vs agomir-miR-410+OE-NC — повышен (P<0,05) (рис. 5в, г).

Bcl-2 снижен, Bax повышен в группе АНГБК vs норма (P<0,05). В agomir-miR-410 и Wnt-11-siRNA vs agomir-NC и siRNA-NC — Bcl-2 повышен, Bax снижен (P<0,05). В agomir-miR-410+OE-Wnt-11 vs agomir-miR-410+OE-NC — Bcl-2 снижен, Bax повышен (P<0,05) (рис. 5д–ж).

Урегулирование miR-410 и низкая экспрессия Wnt-11 увеличивают остеобласты и уменьшают остеокластов

TRAP: норма — остеокласты штовидные/пузообразные, у костного мозжечка. Группы АНГБК, agomir-NC, siRNA-NC, agomir-miR-410+OE-Wnt-11 — много TRAP+ крупных поликариоocytes, ресорбционные лунки. Группы agomir-miR-410, Wnt-11-siRNA, agomir-miR-410+OE-NC — мало TRAP+, правильной формы, поликариоocytes редки, трабекулы цельные (рис. 6а).

ALP: норма — малые круглые ALP+ остеобласты агрегатами в трабекулярном пространстве и на поверхности. Группы АНГБК, agomir-NC, siRNA-NC, agomir-miR-410+OE-Wnt-11 — разбросанные. Группы agomir-miR-410, Wnt-11-siRNA, agomir-miR-410+OE-NC — много ALP+, в трабекулярном пространстве и на поверхности (рис. 6в).

Количественно: vs норма — остеобласты снижены, остеокласты повышены в группе АНГБК (P<0,05). Vs agomir-NC и siRNA-NC — остеобласты повышены, остеокласты снижены в agomir-miR-410 и Wnt-11-siRNA (P<0,05). Vs agomir-miR-410+OE-NC — остеобласты снижены, остеокласты повышены в agomir-miR-410+OE-Wnt-11 (P<0,05) (рис. 6б, г).

Высокая экспрессия miR-410 и низкая Wnt-11 повышают OCN, ALP, BGLAP, Collα1 и снижают NTX-1, CTX-1, ACP5, CTSK, MMP9 у крыс с АНГБК

ЭЛИСА: vs норма — ALP и OCN снижены, NTX-1 и CTX-1 повышены в группе АНГБК (P<0,05). Vs agomir-NC и siRNA-NC — ALP, OCN повышены, NTX-1, CTX-1 снижены в agomir-miR-410 и Wnt-11-siRNA (P<0,05). Vs agomir-miR-410+OE-NC — ALP, OCN снижены, NTX-1, CTX-1 повышены в agomir-miR-410+OE-Wnt-11 (P<0,05) (рис. 7а).

Вестерн-блот и RT-qPCR: vs норма — ALP, BGLAP, Collα1 снижены, ACP5, CTSK, MMP9 повышены (P<0,05). Vs agomir-NC и siRNA-NC — ALP, BGLAP, Collα1 повышены, ACP5, CTSK, MMP9 снижены в agomir-miR-410 и Wnt-11-siRNA (P<0,05). Vs agomir-miR-410+OE-NC — ALP, BGLAP, Collα1 снижены, ACP5, CTSK, MMP9 повышены в agomir-miR-410+OE-Wnt-11 (P<0,05) (рис. 7б–д).

Повышенная Wnt-11 и сниженная miR-410 в тканях крыс с АНГБК; Wnt-11 — мишень miR-410

Биоинформатика (targetscan.org): специфическая связывающая область между Wnt-11 и miR-410 (рис. 8а). Люциферазный анализ: vs NC — люцифераза снижена в группе miR-410 mimics (P<0,05), в MUT 3'UTR — разницы нет (P>0,05), подтверждая специфическую связь (рис. 8б).

Вестерн-блот и RT-qPCR: vs норма — miR-410 снижена, Wnt-11 повышена в группе АНГБК (P<0,05). Vs agomir-NC — miR-410 повышена, Wnt-11 снижена в agomir-miR-410 (P<0,05). Vs siRNA-NC — Wnt-11 снижена в Wnt-11-siRNA (P<0,05). В agomir-miR-410+OE-Wnt-11 vs agomir-miR-410+OE-NC — Wnt-11 повышена (P<0,05) (рис. 8в–е).

Иммуногистохимия: Wnt-11 в цитоплазме, коричнево-желтое. Vs норма — положительность Wnt-11 повышена в группе АНГБК (P<0,05). Vs agomir-NC и siRNA-NC — снижена в agomir-miR-410 и Wnt-11-siRNA (P<0,05). Vs agomir-miR-410+OE-NC — повышена в agomir-miR-410+OE-Wnt-11 (P<0,05) (рис. 8ж, з).

Обсуждение

АНГБК — болезнь разрушения кости из-за нарушения кровоснабжения и коагуляции/фибринолиза, ведущая к коллапсу головки [19]. Ранее изучали miRNA в костном мозге при стероидном АНГБК [20, 21]. Показано, что Li-nHA/GM/rhEPO стенты активируют Wnt и HIF-1/VEGF, стимулируя остеогенез и ангиогенез при глюкокортикоидном АНГБК [22]. Наша цель — эффекты miR-410 через Wnt-11.

Мы показали: miR-410, ALP, BGLAP, Collα1 снижены; Wnt-11, ACP5, CTSK, MMP9 повышены при АНГБК. miR-410 снижена в остеосаркоме с антиопухолевым эффектом [23]. miR-410 снижена в ER+ раке молочной железы [24]. Wnt-11 повышена в колиторектальной раке, продвигает миграцию/инвазию [25]. Wnt-11 повышена в гормонезависимом раке простаты [26]. ALP — маркер диагноза/прогноза [27]. OCN (BGLAP) — консервативный белок минерализации [28]. ACP5 необходим для дифференцировки остеокластов и ресорбции [29]. CTSK — ключевая протеаза деградации коллагена I типа [30]. MMPs деградируют ЭКМ и базальную мембрану, важны в инвазии/метастазах [31]. Wnt-11 — мишень miR-410, аналогично miR-410 таргетирует Wnt3a 3'-UTR для модуляции Wnt-пути [32].

Урегулирование miR-410 и даунрегуляция Wnt-11 повышали BMD и BV/TV у крыс с АНГБК. Ранее: снижение BMD позвоночника и повышение DPD/Cr в моче при невравматическом АНГБК [33]. BMD головки и поясницы снижены при АНГБК [34]. Мускон восстанавливает BMD и BV/TV некротической головки, гистология подтверждает защиту от алкогольного АНГБК [35]. Высокая miR-410 и низкая Wnt-11 подавляли а폽тоз остеоцитов. Силенсинг miR-410 индуцирует пролиферацию и снижает а폽тоз ЭНДК от оксидированного ЛПНП [36]. Снижение miR-410 и повышение SOCS3 снижают Bcl-2 и продвигают а폽тоз [37]. Даунрегуляция Wnt-11 предотвращает нейроэндокринную дифференциацию и вызывает а폽тоз рака простаты при андрогенной дефициции [26]. Даунрегуляция Wnt-11 и урегулирование miR-410 повышали ALP, BGLAP, Collα1 и снижали ACP5, CTSK, MMP9. Wnt-11 в раке шейки матки активирует JNK-1 через Wnt/JNK, стимулирует пролиферацию/инвазию [15]. Силенсинг Wnt-11 снижает инвазию колиторектальной рака [25]. Оэ-miR-410 ингибирует инвазию, миграцию, пролиферацию, ЭМТ остеосаркомы через TRIM44 [23]. Оэ-miR-410 ингибирует рост холиоकारциномы в ксенографте за счет индукции аоптоза [38].

Заключение

miR-410 гипоэкспрессируется, Wnt-11 гиперекспрессируется при АНГБК. Урегулирование miR-410 или даунрегуляция Wnt-11 увеличивают остеобласты, уменьшают остеокласты, смягчая АНГБК. Требуются клинические исследования для оценки эффективности miR-410 и Wnt-11 в лечении АНГБК.

Доступность данных и материалов

Не применимо

История изменений

Аббревиатуры

ALP:

Щелочная фосфатаза

ANOVA:

Дисперсионный анализ

BMD:

Минеральная плотность кости

EDTA:

Этилендиаминтетрауксусная кислота

ELISA:

Иммуноферментный анализ

GAPDH:

Глицеральдегид-фосфат-дегидрогеназа

GE:

General Electric

HE:

Гемоксилин-эозин

LSD-t:

Наименьшая значимая разница t-тест

miR-410:

МикроРНК-410

miRNAs:

МикроРНК

NC:

Негативный контроль

OD:

Оптическая плотность

ONFH:

Асептический некроз головки бедренной кости

PBS:

Фосфатно-буферный раствор

ROI:

Зоны интереса

RT-qPCR:

Обратная транскрипция количественная ПЦР

SD:

Sprague-Dawley

SDS:

Додецилсульфат натрия

THR:

Тотальная эндопротезировка тазобедренного сустава

TRAP:

Тартрато-устойчивая кислая фосфатаза

TUNEL:

TdT-опосредованное dUTP-биотин-ник-энд-лейблинг