Инновационные нуклеозид-липидные наноносители усиливают доставку сорафениба и снижают токсичность

Аннотация

Хотя применение сорафениба, малого ингибитора тирозиновых протеинкиназ, в лечении рака остается всемирной опцией в химиотерапии, необходимы новые стратегии для решения проблем низкой водорастворимости (< 5 мкМ), токсичности и побочных эффектов этого препарата. В этом контексте использование наноносителей в настоящее время исследуется для преодоления этих недостатков. В данном вкладе мы сообщаем о новом типе наночастиц сорафениба, стабилизированных гибридными нуклеозид-липидами. Твердые липидные наночастицы (TLN) показали отрицательные или положительные значения дзета-потенциала в зависимости от заряда нуклеозид-липида. Проходная электронная микроскопия сорафениб-нагруженных TLN раскрыла параллелепипедные наночастицы около 200 нм. Биологические исследования на четырех различных клеточных линиях, включая печеночный и рак груди, выявили усиленные антираковые активности сорафениб-базированных TLN по сравнению со свободным препаратом. Важно, что изображения контрастной фазовой микроскопии, записанные после инкубации раковых клеток в присутствии TLN при высокой концентрации сорафениба (> 80 мкМ), выявили полную смерть раковых во всех случаях. Эти результаты подчеркивают потенциал нуклеозид-липидных TLN как систем доставки лекарств.

Введение

Сорафениб, коммерциализируемый под названием Nexavar™, является гидрофобным ингибитором протеинкиназ [1], одобренным для лечения различных человеческих раков, включая передовой рак почек (RCC) [2], гепатоцеллюлярную карциному (HCC) [3] и передовой рак щитовидной железы. Сорафениб имеет множество известных мишеней протеинкиназ, включая трансмембранные рецепторы и внутриклеточные тирозиновые и серин-треониновые 키назы, и также показано, что он индуцирует апоптоз. С точки зрения механизма действия, сообщается, что сорафениб ингибирует рост опухоли через множественные мишени, действуя непосредственно на опухоль и/или на ангиогенез опухоли (через ингибирование сигнализации VEGFR и PDGFR) [4, 5]. Его эффективность в ингибировании роста злокачественных клеток была продемонстрирована во многих гистологических типах рака, таких как меланома [6], рак щитовидной железы [7], поджелудочная железа [5], гепатоцеллюлярная карцинома и лейкемия [8], например. Однако низкая водорастворимость, токсичность и побочные эффекты ограничивают использование сорафениба во многих клинических приложениях. Для решения этих проблем в настоящее время исследуются несколько формулировок сорафениба [9, 10], включая жидкокристаллические наночастицы [11], наноэмульсии [12], циклодекстрин-модифицированные пористые кремнезёмные наночастицы [13], лекарственные нанокомпозиты с контролируемым высвобождением [14], полиэлектролитные наночастицы [15] или самособирающиеся наночастицы куркумина [16]. Однако липидные наночастицы (LN), загруженные сорафенибом, были плохо изучены [17, 18].

В данной работе мы сообщаем о первом примере твердых липидных наночастиц (TLN) [19] на базе сорафениба, стабилизированных нуклеозид-липидами [20,21,22]. Хроматографические исследования, проведенные на положительно и отрицательно заряженных нуклеолипидах (DOTAU и diC₁₆dT соответственно), указывают на то, что эти амфифилы обладают требуемой стабильностью и чистотой для их использования в рамках приложений доставки лекарств [23, 24]. Простая нанопреципитационная процедура позволяет формировать TLN с либо положительным (TLN⁺), либо отрицательным зарядами (TLN⁻) (рис. 1). Стоит отметить, что все изученные TLN усилили цитотоксический эффект сорафениба на различных человеческих карциномах, демонстрируя, что TLN могут преодолеть ограничения сорафениба в терминах водорастворимости и антираковой активности.

Схема формулировки TLN. Химические структуры анионного нуклеотид-липида, тимидина 3'-(1,2-дипальмитоил-sn-глицеро-3-фосфат) (diC₁₆dT), катионного нуклеозид-липида DOTAU (2',3'-диолеил-5'-дезокси-5'-триметил-аммоний-урдин) и сорафениба, используемого в этом исследовании (слева). Схематическое изображение TLN с параллелепипедной формой, полученных после нанопреципитации нуклеолипида (либо diC₁₆dT, либо DOTAU, ведущих к TLN⁻ и TLN⁺ соответственно) с сорафенибом (справа). Схематическое представление адаптировано от ТЭМ-изображения, показывающего DOTAU сорафениб-нагруженные наночастицы (вставка, бар 500 нм)

Методы

Химикаты и реактивы

Метанол (MeOH), муравьиная кислота (FA) и аммиачная формате (AFNH₄) приобрели у VWR Chemicals (Франция) и все были HPLC (высокоэффективная жидкостная хроматография) чистоты. Вода HPLC-чистоты (минимальная удельная сопротивляемость 18,2 МΩ) производилась в лаборатории системой ELGA Millipore (Франция). DOTAU (CAS Number: 868226-06-6) и diC₁₆dT (CAS Number: 1160002-70-9) синтезировали в лаборатории согласно протоколу, описанному в ссылках [23,24,25]. Сорафениб, 4-[4-[[4-хлор-3-(трифторметил)фенил]карбамоил-амино]фенокси]-N-метил-пиридин-2-карбоксамid (CAS number: 284461-73-0) приобрели у SynVec https://synvec.fr (Ref# D114250414).

Хроматографические исследования

Разработан обратно-фазный UHPLC (ультра-высокопроизводительная жидкостная хроматография) метод для квантификации нуклеолипидов (DOTAU и diC₁₆dT) и сорафениба в TLN. Перед инъекцией в HPLC водные растворы наночастиц разбавляли этанолом в 5 и 10 раз для квантификации нуклеолипидов и сорафениба соответственно.

Хроматографическая система UHPLC UltiMate 3000 от Dionex-Thermo Scientific (США), состоящая из насоса с четвертичным клапанным системой для выбора колонки, термостатируемого автопробоотборника и термостатируемого колонкового отсека, использовалась. Разделение проводили колонкой Syncronis C18 50 × 2,1 мм, 1,7 мкм. Мобильная фаза состояла из 70/30 MeOH/25 мМ аммиацетат (pH = 7,4) (A) и 26,5 мМ аммиацетат в MeOH (pH = 7,9) (B). Скорость потока 0,2 мл/мин, градиентный профиль 0–2 мин, 0–100% B; 2–20 мин, 100% B. Температура колонки 25 °C. Детекция выполняли при 267 нм для сорафениба и diC₁₆dT и 257 нм для DOTAU. Инъецируемый объем 1 мкл, обеспечивающий пределы квантификации 0,6 нг для сорафениба и 15 нг для обоих нуклеолипидов DOTAU и diC₁₆dT.

Калибровочные кривые для сорафениба, DOTAU и diC₁₆dT в этаноле показаны в Дополнительном файле 1: Рисунки SI1, SI2 и SI3 соответственно.

Подготовка наночастиц сорафениба

10 мг сорафениба растворили в 1 мл этанола, и 10 мг НЛ (либо diC₁₆dT, либо DOTAU) растворили в 1 мл этанола. 100 мкл НЛ, 100 мкл растворов сорафениба и 800 мкл этанола смешивали вместе при комнатной температуре и добавляли капельно в 10 мл дистиллированной воды под магнитным перемешиванием. Раствор помещали в ультразвуковую баню на 90 мин при 25 °C. Этанол удаляли под вакуумом при 30 °C, и объем корректировали до 1 мл. Этот раствор сонировали дважды ультразвуковым зондом 6 мм (Vibracell 75186) на 10 мин при 100% амплитуде с импульсом 2 сек каждые 5 сек. 1 мл диализировали против 30 мл дистиллированной воды на 3 × 15 мин. Этот объем корректировали до 2 мл и сохраняли для характеристики, квантификации и исследований стабильности. Также контрольные эксперименты проводили по тому же протоколу в отсутствии нуклеолипидов.

Проходная электронная микроскопия (TEM и EDX)

Наночастицы визуализировали методом негативного контраста. 10 мкл наночастиц переносили на углерод-покрытую медную сетку на 10 мин. Образец затем сушили и контрастировали 2,5% (w/w) уранила ацетат в воде на 2 мин. Образцы наблюдали на электронном микроскопе Hitachi H 7650. Энергодисперсионная рентгеновская спектроскопия выполнялась с помощью проходного электронного микроскопа TECNAI, соединенного с Quantax-X-Flash SVE 6.

Определение размера частиц и дзета-потенциала

Дзета-потенциал и размер частиц определяли с помощью Zetasizer NanoZS, Malvern. Эксперименты проводили с 40 мкл наночастиц, разбавленных в 400 мкл воды, измерения выполняли при 25 °C.

Цитотоксический анализ

HuH7 и HepG2 выращивали в монослое в DMEM-Glutamax с добавлением 10% фетальной телячьей сыворотки. MDA-MB-134 и T-47D выращивали в монослое в RPMI с добавлением 10% фетальной телячьей сыворотки (для T-47D только несущественные АА 1X, глюкоза 0,45%, инсулин 10 мг/л и натрий пируват 1X). Все реагенты для культивирования были от Invitrogen. 10⁴ клеток/колодку в 90 мкл полной среды засевали в 96-колодочную пластину и инкубировали 24 ч при 37 °C и 5% CO₂, перед добавлением 10 мкл либо TLN, либо сорафениба в среду. Сорафениб (CAS number: 284461-73-0) растворили в среде с 0,1% DMSO. Обратите внимание, что в этих условиях максимальная концентрация сорафениба без осаждения составляла 5 мкМ, тогда как для TLN, загруженных сорафенибом, максимальная тестируемая концентрация была 120 мкМ без DMSO. После 4 дней инкубации живучесть клеток оценивали формазановой пролиферативной анализом (CellTiter 96® Aqueous One Solution Cell Proliferation Assay kit, Promega), добавляя 20 мкл/колодку реактивного раствора. После 30-минутной инкубации при 37 °C, 5% CO₂, абсорбция каждой колодки измеряли на длине волны 492 нм с помощью спектрофотометра Berthold. Результаты выражаются в процентах \( \frac{{\mathrm{OD}}_{492}\ \mathrm{of}\ \mathrm{treated}\ \mathrm{cells}-{\mathrm{OD}}_{492}\ \mathrm{of}\ \mathrm{blank}}{\ {\mathrm{OD}}_{492}\mathrm{of}\ \mathrm{untreated}\ \mathrm{cells}-{\mathrm{OD}}_{492}\ \mathrm{of}\ \mathrm{blank}} \).

Исследования живучести клеток

HuH7 выращивали как описано ранее в разделе «Цитотоксический анализ». Живучесть клеток выполняли после 4 дней инкубации с TLN⁺, загруженными сорафенибом, при разных концентрациях (0, 1, 5, 10, 25, 50 и 100 мкМ) с использованием live/dead теста живучести клеток (Invitrogen). Кратко, среду удаляли, и адгерирующие клетки промывали один раз раствором Хэнкса сбалансированной соли (HBSS). 200 мкл HBSS, содержащего 2 мкМ кальцеина ацетилоксиметил эфира и 4 мкМ этидиума гомодимера-1, добавляли в каждую колодку и инкубировали 45 мин при 37 °C и 5% CO₂. После окраски клетки промывали один раз HBSS и микроскопировали на инвертированном флуоресцентном микроскопе. Процент мертвых клеток оценивали анализом флуоресцентно-активированной сортировки клеток (FACS). После окраски 4 мкМ раствором этидиума гомодимера-1, клетки обрабатывали трипсином и промывали дважды фосфатно-буферным раствором (PBS) центрифугированием при 1000 об/мин на 5 мин. Данные получали на потоковом цитометре LSRFortessa от Becton Dickinson, результаты анализировали программным обеспечением DIVA. Образец мертвых клеток готовили с 70% метанолом и использовали как контроль.

Результаты и обсуждение

Синтез и характеристика TLN

Нетоксичность и свойства самосборки нуклеолипидов делают их идеальными амфифильными адьювантами для инкапсуляции гидрофобных лекарств, таких как сорафениб. В этом исследовании разработана простая нанопреципитационная процедура для решения проблем низкой водорастворимости сорафениба и усиления его антираковой активности, которая во многих случаях ограничивает его клиническое применение. Что касается водорастворимости, мы предположили, что гидрофобный характер, гетероциклы и функции водородных связей сорафениба будут способствовать взаимодействию с нуклеолипидами и формированию нанообъектов. Также ожидалось, что TLN, загруженные сорафенибом, должны увеличить антиопухолевую активность за счет усиления клеточного захвата сорафениба. Действительно, в одном из наших предыдущих исследований на наночастицах цисплатина мы продемонстрировали, что усиление антиопухолевой активности цисплатина было обусловлено увеличением количества препарата, интернализированного в раковые клетки [23] [1]. Наш нанопреципитационный процесс включает три этапа: (i) растворение сорафениба в этаноле при 40 °C (10 мг/мл сорафениба, 100 мкл) и добавление одного эквивалента нуклеолипида (либо анионного нуклеотид-липида, diC₁₆-3'-dT [тимидин 3'-(1,2-дипальмитоил-sn-глицеро-3-фосфат)] либо катионного нуклеозид-липида DOTAU [23] [2',3'-диолеил-5'-дезокси-5'-триметил-аммоний-урдин], 100 мкл раствора 10 мг/мл в этаноле; (ii) 1 мл этанольного раствора добавляют капельно при комнатной температуре к 10 мл дистиллированной воды; и (iii) полученная суспензия испаряли для удаления избытка этанола и сонировали.

Хроматографические исследования

Для оценки способностей новой формулировки к загрузке препарата разработали обратно-фазный UHPLC метод. Используя этот HPLC метод, одновременное разделение сорафениба и нуклеолипидов достигнуто за 12 мин, позволяя индивидуальную квантификацию соединений в TLN (Дополнительный файл 1: Рисунки SI1–4).

Отношения загрузки (массовые соотношения сорафениба/нуклеолипидов в наночастицах) 50 и 80% и выходы инкапсуляции сорафениба около 55 и 75% получены для формулировок, состоящих из сорафениба/DOTAU (TLN⁺) и сорафениба/diC₁₆dT (TLN⁻) соответственно. Во время контрольного эксперимента, проведенного в отсутствии нуклеолипида, около 90% сорафениба терялось на разных этапах формулировки, вероятно, из-за низкой растворимости сорафениба в воде. Этот результат демонстрирует, что нуклеолипиды необходимы для растворения сорафениба и стабилизации TLN.

Физико-химические исследования

Эксперименты динамического светового рассеяния (ДСР) проводили для характеристики формирования TLN. Оба отрицательных и положительных нуклеолипидов (diC₁₆dT и DOTAU) формируют похожие несферические наночастицы с параллелепипедной формой в водном растворе с монодисперсностью (индекс полидисперсности, PDI = 0,202 и 0,289; размер = 335,2 и 304,4 нм соответственно, рис. 2 и Дополнительный файл 1: Рисунок SI7). Как ожидалось, дзета-потенциалы TLN-объектов зависят от полярных головок нуклеолипидов (ζ = +59,1 и −54,9 мВ для TLN⁺ и TLN⁻, см. Дополнительный файл 1: Рисунок SI10). Наличие сорафениба в наночастицах подтверждали ТЭМ-изображением и EDX-приобретениями TLN− с EDX-приобретениями. Рис. 2е, ф показывают точки I и II. Точка I на рис. 2ф демонстрирует эмиссию атома хлора (точка I, рис. 2е, ф), указывающую на наличие сорафениба (см. химическую структуру рис. 2ф). Обратите внимание, что хлор присутствует только в точке I и не в точке II (рис. 2ф).

Характеристика TLN. ТЭМ-изображения, показывающие морфологию наночастиц сорафениба с DOTAU (а) и вставка (б). Пример DOTAU-базированной TLN с размером 327 на 172 нм (стрелки), подтверждающий средний размер 304 нм, измеренный ДСР (г). в Пример ТЭМ-изображения, показывающего diC₁₆dT-TLN (стрелки 330 на 500 нм соответственно). (е) ТЭМ-изображение TLN-. I & II точки — локализации, где выполнялся EDX-приобретение. (ф) EDX-спектры в позициях I & II. Пунктирная линия подчеркивает эмиссию атома хлора, которая присутствует только в I. Химическая структура молекулы сорафениба также представлена. Оба спектра нормализованы по эмиссии Cu атома при 8 кэВ (из-за Cu сетки ТЭМ)

Важно, что в контрольных экспериментах нанопреципитация сорафениба в отсутствии нуклеолипида не дала никаких нанообъектов, демонстрируя, что нуклеолипиды позволяют формирование и стабилизацию TLN.

Исследования стабильности

Коллоидная стабильность TLN⁺ и TLN⁻ измерялась ДСР и дзета-потенциалом при двух температурах (рис. 3а и Дополнительный файл 1: Рисунок SI10). В случае diC₁₆dT-базированных формулировок размер TLN⁻ не изменялся после 30 дней при 4 и 37 °C, что указывает на высокую стабильность этих наночастиц (Дополнительный файл 1: Рисунок SI9). Такая стабильность может быть объяснена природой взаимодействий (включающих H-соединения, π-π стекирование, заряд/заряд взаимодействие) между diC₁₆dT и сорафенибом. Однако для DOTAU-базированных формулировок TLN⁺ были стабильны только при 4 °C на 30 дней, как раскрыли ДСР исследования (рис. 3а), тогда как при 37 °C наблюдался рост и размера, и PDI (рис. 3а). Эта относительная нестабильность, наблюдаемая при 37 °C в случае TLN⁺, может быть объяснена отталкивающими кулоновскими взаимодействиями между положительными зарядами как сорафениба, так и DOTAU. Интересно, что коллоидные исследования стабильности указывают на то, что можно модулировать стабильность, а следовательно, доставку сорафениба из TLN в физиологическую среду, в зависимости от нуклеолипида, использованного для стабилизации TLN. Модуляция стабильности может быть привлекательной в зависимости от нужной кинетики высвобождения.

Исследования стабильности TLN. Коллоидная стабильность TLN⁺ (а) и химическая стабильность сорафениба и DOTAU в TLN⁺ во времени при 4 и 37 °C (б). PDI, индекс полидисперсности

Параллельно с коллоидной стабильностью химическая стабильность сорафениба, DOTAU и diC₁₆dT в TLN-базированных формулировках исследовалась как функция времени при 4 и 37 °C с использованием нового хроматографического метода (см. Дополнительный файл 1: Рисунок SI4). Кинетические исследования при обеих температурах показаны на рис. 3б и Дополнительный файл 1: SI5 для DOTAU-TLN и diC₁₆dT-TLN соответственно. Результаты показывают, что молекулы сорафениба и diC₁₆dT в формулировках остаются стабильными по крайней мере 1 месяц, указывая на долгосрочную химическую стабильность при обеих температурах в случае TLN⁻. Однако снижение DOTAU во времени наблюдалось в TLN⁺ формулировках. Сначала при 4 °C потери около 12% за 7 дней и 20% за 30 дней измерялись. При повышении температуры стабильность DOTAU снижалась с потерей 55% за 7 дней и до 95% за 30 дней при 37 °C. Такие различия в химической стабильности между нуклеолипидами уже были выявлены в предыдущих исследованиях стабильности (см. Дополнительный файл 1: Рисунок SI6).

Биологические исследования

Цитотоксичность TLN оценивали метаболической активностью и морфологией клеток. MTT-тест позволял сравнивать свободный сорафениб (в 0,1% DMSO) и TLN, загруженные препаратом (рис. 4) на четырех клеточных линиях, включая две гепатоцеллюлярные карциномы (HuH7 и HepG2) и две люминальные раки груди (MDA-MB-134 и T-47D). Во-первых, при концентрациях, близких к максимальной растворимости свободного сорафениба (5 мкМ сорафениба в 0,1% DMSO, 2,8 мкМ для наночастиц сорафениба/DOTAU и 4 мкМ для наночастиц сорафениба/diC₁₆dT), оба TLN ингибировали живучесть клеток лучше, чем свободный сорафениб. Как показано на рис. 4б, исследование живучести клеток, проведенное на клетках MDA-MB-134, указало на то, что активность свободного сорафениба ограничена его водорастворимостью (100% живучести клеток при [сорафениб] = 5 мкМ), тогда как значения IC₅₀ 15 и 50 мкМ наблюдались для TLN⁺ и TLN⁻ соответственно (рис. 4б). В FACS исследовании на HuH7 получено IC₅₀ примерно 50 мкМ (Дополнительный файл 1: Рисунки SI12 и SI13). Изображения фазовой контрастной микроскопии действительно показывают сниженную плотность клеточных слоев, обработанных либо TLN⁻, либо TLN⁺ по сравнению с необработанными или сорафениб-обработанными клетками без изменения морфологии клеток (Дополнительный файл 1: Рисунок SI11). Во-вторых, подобные эксперименты проводили при более высоких концентрациях TLN ([сорафениб] = 120 и 84 мкМ для TLN⁻ и TLN⁺ соответственно) и сравнивали с свободным сорафенибом на пределе растворимости (концентрация 5 мкМ). В этих условиях оба TLN демонстрируют сильный цитотоксический эффект на четырех раковых клеточных линиях, как показано на рис. 5. Как раскрыто на изображениях фазовой контрастной микроскопии, клеточные обломки наблюдались для обоих TLN⁻ (рис. 5C1–4) и TLN⁺ (рис. 5D1–4), свидетельствуя о смерти клеток, тогда как клетки оставались живыми в случае свободного сорафениба (рис. 5B1–4). Стоит отметить, что сильные цитотоксические эффекты для обоих TLN наблюдались в случае люминального B рака груди (рис. 5C1–2 и D1–2). Такой антиопухолевой эффект, который не сообщался ранее, открывает новые возможные терапевтические применения сорафениба благодаря TLN.

Цитотоксический эффект сорафениба или TLN. а) Сравнение цитотоксичности со свободным Сорафенибом или TLN Сорафениба в 4 клеточных линиях (2 люминальных B рака груди и 2 гепатоцеллюлярные карциномы) после квантификации MTS-тестом на 3 колодках при 5 мкМ свободного Сорафениба, 2,8 мкМ НЧ Сорафениба/DOTAU (TLN+) и 4 мкМ НЧ Сорафениба/diC16dT (TLN-). б) Тест живучести клеток (клетки MDA-MB-134) в присутствии свободного сорафениба (предел растворимости), TLN+ (серый) или TLN- (черный)

Сравнение морфологий клеток между контролем, свободным сорафенибом или TLN. Изображения фазовой контрастной микроскопии, показывающие цитотоксичность в разных условиях на четырех человеческих карциномных клеточных линиях (гепатоцеллюлярные карциномы HuH7, HepG2 и люминальные карциномы груди MDA-MB-134, T-47D). А) В отсутствии сорафениба (контрольные эксперименты, A1–A4 для MDA-MB-134, T-47D, HuH7, HepG2 клеточных линий соответственно). B) Клетки инкубировали 4 дня в присутствии 5 мкМ свободного сорафениба. C и D) клетки инкубировали в присутствии TLN⁻ и TLN⁺ при концентрации сорафениба 84 и 120 мкМ соответственно

Заключение

Мы сообщаем о новом подходе на базе нуклеолипидов, позволяющем эффективную инкапсуляцию и доставку сорафениба. Наши исследования демонстрируют формирование двух типов твердых липидных наночастиц (TLN), высоконагруженных сорафенибом. Эти TLN, показывающие либо отрицательные, либо положительные значения дзета-потенциала, имеют параллелепипедную форму. Как раскрыто ДСР и HPLC исследованиями, стабильность TLN может быть модулирована в зависимости от используемого нуклеолипида. Важно, что обе формулировки TLN⁺ и TLN⁻ способны драматически улучшить водорастворимость сорафениба (концентрации выше 120 мкМ). Такие TLN демонстрируют лучшие антиопухолевые активности на четырех раковых клеточных линиях (печень и грудь) по сравнению со свободным сорафенибом, который ограничен из-за отсутствия растворимости в воде. Изображения фазовой контрастной микроскопии, записанные на четырех раковых клеточных линиях, демонстрируют резкую смертность клеток при инкубации с 120 мкМ TLN⁻ или 84 мкМ TLN⁺. Следовательно, этот препарат может быть использован как новые терапевтические опции в случае печеночных раков (использование сорафениба в внутриартериальной химиотерапии, например) или раков груди. Насколько нам известно, этот отчет является первым примером исследования использования сорафениба против люминального B рака груди, демонстрирующим полезность подхода TLN. Все вместе результаты, сообщенные в этом вкладе, подчеркивают потенциал нуклеозид-липидных TLN как систем доставки лекарств.

Аббревиатуры

AFNH₄:

Аммиачная формате

DLS:

Динамическое световое рассеяние

FA:

Муравьиная кислота

HCC:

Гепатоцеллюлярная карцинома

HPLC:

Высокоэффективная жидкостная хроматография

LNs:

Липидные наночастицы

MeOH:

Метанол

PDI:

Индекс полидисперсности

RCC:

Рак почек

SLNs:

Твердые липидные наночастицы

UHPLC:

Ультра-высокопроизводительная жидкостная хроматография