pH-чувствительный ферритиновый наноноситель для контролируемой доставки ресвератрола при таргетированной химиотерапии опухолей

Аннотация

В этом отчете представлена pH-индуцированная реверсибельная система сборки (PIRAS) на основе ферритина (Ft) для таргетированной терапии опухолей. Она разработана для легкой загрузки и освобождения антиопухолевого препарата ресвератрол (RV), используя естественную pH-чувствительность и уникальную полую полость Ft. На поверхность RV-загруженного Ft (RV@Ft) был сконюгирован опухолевспецифический таргетирующий пептид Arg-Gly-Asp (RGD), формируя биокомпатибильные наночастицы (RV@Ft-RGD). pH-чувствительность Ft позволяет ему денaturироваться в полую пористую наносферу в кислой среде и ренатурироваться в герметичную полую наносферу в нейтральной среде. С помощью pH-манипуляций RV@Ft-RGD диаметром ~21 нм показал высокую загрузку RV — 79,6%. pH-триггерируемое освобождение RV измерялось в соотношении 50,3% при pH 5,0 за 24 часа. В нейтральной среде RV@Ft-RGD демонстрировал отличную стабильность более 20 дней. Конфокальная флуоресцентная визуализация показала высокую клеточную адсорбцию RV@Ft-RGD и колокализацию с лизосомой, преимущественно из-за RGD-опосредованного таргетирующего эффекта. Благодаря высокой загрузке лекарства, pH-триггерируемому освобождению и таргетированию опухолевых клеток, RV@Ft-RGD проявил высокую цитотоксичность in vitro и in vivo. Биокомпатибильность in vitro и in vivo также была отличной, без системной токсичности. Концепция PIRAS на базе Ft значительно подавляет рост опухолей и одновременно расширяет применение Ft в наномедицине.

Введение

Рак легкого — одна из самых смертоносных твердых злокачественных новообразований у людей. С ухудшением экологии и другими факторами заболеваемостью раком легкого растет год за годом, а 5-летняя выживаемость составляет всего 17,4%. В настоящее время, хотя доступны традиционные клинические методы — хирургическое удаление, лучевая терапия и стандартная химиотерапия первой линии, медианная общая выживаемость пациентов с раком легкого все еще требует улучшения. Поэтому срочно необходимы более эффективные и безопасные методы лечения. В настоящее время, хотя низкая таргетированность и высокие побочные эффекты многих химиотерапевтических препаратов ограничивают их применение, постоянно разрабатываются новые агенты, особенно в новом поле нанопрепаратов. Ресвератрол (RV) — экстракт натуральных растений (виноград, соя), широко используемый в клинике для стимуляции тромбоцитарной агрегации, ингибирования вазодилатации, снижения вязкости крови и т.д. В последние годы также обнаружен его сильный антиопухолевый эффект. Однако как потенциальное малое молекулярное препарат, RV имеет недостатки, как и другие препараты первой линии — плохая растворимость, короткий период полувыведения из крови и отсутствие опухолевой селективности. RV-базированные нанопрепараты разрабатывались в последние годы для преодоления этих недостатков и усиления терапевтического эффекта. Различные наноносители использовались для загрузки RV: липосомы, сывороточный альбумин, углеродные материалы, двухмерные дихалькогениды переходных металлов (2D-TMDs) и другие. Хотя эти наноносители эффективно усиливали терапевтический эффект RV, они все еще имеют недостатки — такие как высокая эффективность активного триггерного освобождения для липосом и сывороточного альбумина, и потенциальная долгосрочная системная токсичность для углеродных материалов и 2D-TMDs. Поэтому все еще существует потребность в более квалифицированных наноносчителях.

Ферритин — естественный наноклеточный белок с люменом ~8 нм, образованный взаимодействием и сборкой 24 подединиц тяжелых и легких цепей. Будучи эндогенным белком, ферритин обладает отличной биокомпатибильностью и безопасностью. Кроме того, есть отчет о том, что ферритин — естественный pH-чувствительный белок, способный к реверсибльной денaтурации и реассамблее при изменении среды от кислой к щелочной. При кислом pH дисассоциированные стержнеподобные олигомеры восстанавливаются только до голововидной структуры, а дисассоциированные голововидные промежуточные продукты — только до полой сферической структуры. Это уникальное pH-триггерируемое поведение сборки и дисассембли делает ферритин идеальной системой доставки лекарств. Недавно Чжан и соавт. сообщили, что молекулы дохорубицина (DOX) могут быть инкапсулированы в ферритин и успешно высвобождены pH-регуляцией для терапии опухолей.

В этом исследовании мы стремились разработать ферритиновую pH-индуцированную реверсибельную систему сборки (PIRAS) для контроля загрузки и освобождения RV для усиленной таргетированной химиотерапии. Поверхность ферритиновой сферы была связана с опухолевым таргетирующим пептидом RGD. Полученный нанопрепарат RV@Ft-RGD демонстрировал стабильность в нейтральной и щелочной средах (pH > 7,4) и высвобождал RV только в кислой среде (pH < 7,4). При дальнейшей характеристике RV@Ft-RGD показал следующие преимущества in vitro и in vivo: (1) RV@Ft-RGD таргетировал опухолевые клетки и накапливался в лизосоме (кислой среде), где облегчало высвобождение большего количества RV в цитоплазму; (2) ферритиновый носитель значительно удлинил период полувыведения свободного RV в крови, улучшая удержание препарата в системном кровотоке для фасилитации накопления препарата в опухолевых узлах; (3) архитектурная стабильность ферритина предотвращала прорывную утечку RV в процессе доставки; (4) RV@Ft-RGD проявил отличную биокомпатибильность in vitro и in vivo. Поэтому, благодаря этим преимуществам, RV@Ft-RGD продемонстрировал выдающиеся антиопухолевые терапевтические свойства, показывая большой потенциал для будущей клинической трансляции.

Материалы и методы

Материалы

Ферритин, ресвератрол (RV, ≥99%) — от Sigma-Aldrich. 1-этил-3-(3-диметиламинопропильный)карбодиимид (EDC), N-гидрокси숙цинимид (NHS) и флуоресцеин изотиоцианат (FITC) — от Aladdin Bio-Chem Technology Co., Ltd (Шанхай, Китай). NH₂-PEG₂₀₀₀-RGD — от Hunan Huateng Pharmaceutical Co., Ltd (Хунань, Китай). DMEM, фетовый бычий сывороточный альбумин (FBS) и фосфатно-буферный раствор (PBS) — от Invitrogen (Карлсбад, США). Набор CCK-8 — от Dojindo Laboratories (Япония).

Синтез RV@Ft-RGD

Загрузка RV проводилась по предыдущему отчету с модификациями. Во-первых, NH₂-PEG₂₀₀₀-RGD (10 мг) диспергировали в растворе Ft (1,5 мг/мл) в присутствии 20 мкл EDC (5 мг/мл) и 20 мкл NHS (20 мг/мл). Смесь реагировали 2 часа при 4 °C с легким перемешиванием и очищали диализом против дистиллированной воды (MW cut off = 5 кДа) на ночь, получая наночастицы Ft-RGD. Затем нерастворимый в воде RV растворяли в DMSO до 2 мг/мл и добавляли в раствор Ft-RGD с конечной концентрацией 1,5 мг/мл. pH смеси регулировали до pH = 5 для дисассемблирования полипептидных подединиц. Затем pH медленно поднимали до 7,4 гидроксидом натрия (1 М) для реассамблеи подединиц. Полученный раствор диализировали в дистиллированной воде на ночь для удаления свободных молекул RV, получая конечный продукт (RV@Ft-RGD). Количество загруженного RV определяли УФ-спектрофотометром (UV3100, Shimadzu, Япония) по пику поглощения при 306 нм. Коэффициент загрузки RV = (Aa − Ab)/Ac, где Aa, Ab, Ac — масса начального, незагруженного RV и Ft-RGD соответственно.

Характеризация

Динамическое световое рассеяние (DLS, BI-9000AT, Brookhaven, США) использовали для определения размера и дзета-потенциала наночастиц. Морфологию наблюдали передаточной электронной микроскопией (TEM, JEM-100S, JEOL, Япония). Флуоресцентные спектры — на люминесцентном спектрофотометре Perkin-Elmer LS50B. Клеточные флуоресцентные сигналы — коммерческим лазерным сканирующим микроскопом (LSM 510, Zeiss, Германия) и потоковой цитометрией (FCM, EPICS XL, Beckman, США).

Исследование освобождения RV

500 мкл раствора RV@Ft-RGD помещали в D-трубку (MWCO 6–8 кДа, Novagen), раствор регулировали до разных pH с помощью буферов. Затем диализировали при 37 °C. После разных времен инкубации 1 мл диализата удаляли и заменяли на 1 мл свежей среды. Высвобожденный RV в разные моменты времени определяли УФ-спектрофотометром. Кроме того, RV@Ft-RGD растворяли в промывочном растворе с разными pH (5, 6,5, 7,4, 8,5). После инкубации при 37 °C в течение 24 часов размер наночастиц характеризовали DLS.

Клеточная культура

Клетки человеческого рака легкого A549 и NCI-H358 получены из Коллекции клеток Китайской академии наук (Шанхай, Китай), культивировались в DMEM с 10% FBS и 1% пенициллин-стрептомицин в увлажненной атмосфере с 5% CO₂ при 37 °C.

Клеточная адсорбция и локализация RV@Ft-RGD

Для маркировки наночастиц использовали FITC. FITC растворяли в этаноле (2,0 мг/мл) и смешивали с водными растворами RV@Ft и RV@Ft-RGD (1,0 мг/мл) при 4-часовом перемешивании в темноте при комнатной температуре. Смесь диализировали в дистиллированной воде на ночь для удаления избытка FITC и этанола, получая FITC-маркированные RV@Ft и RV@Ft-RGD. Для подтверждения органелльной локализации наночастиц in vitro клетки, обработанные FITC-маркированными RV@Ft и RV@Ft-RGD в течение 5 часов, окрашивали лизосомно-специфическим красителем Lyso Tracker Red (Invitrogen). Затем клеточную интернализацию RV@Ft и RV@Ft-RGD наблюдали с помощью CLSM. Кратко: клетки A549 инкубировали с FITC-маркированными RV@Ft и RV@Ft-RGD (при одинаковой концентрации FITC) 5 часов. Затем клетки обрабатывали растворами Lyso Tracker Red (100 нМ) при 37 °C в течение 30 мин. После трехкратного промывания PBS клетки наблюдали коммерческим лазерным сканирующим микроскопом. Программа ImageJ использовалась для анализа флуоресцентной интенсивности клеток.

In vitro химиотерапия опухолей и изучение аоптоза

Во-первых, цитотоксичность носителя Ft-RGD оценивали стандартным тестом CCK-8 (Bestbio, Китай). Клетки A549 и NCI-H358 (1×10⁵ клеток/мл, 0,5 мл) посевали в 96-колодчатые пластинки и культивировали 24 часа. После удаления старой среды, свежая среда с 0, 0,01, 0,1, 0,5 и 1 мг/мл Ft-RGD инкубировалась с клетками 24 часа. Клетки аккуратно промывали трижды PBS. 100 мкл рабочего раствора CCK-8 (10% CCK-8 + 90% DMEM) добавляли в каждую колодку и инкубировали 30 мин при 37 °C. Абсорбция при 450 нм измеряли микроплаточным спектрофотометром (Multiskan FC, Thermo Scientific). Фотографии каждой группы клеток наблюдали оптическим микроскопом (Olympus).

Различные концентрации свободного RV, RV@Ft, RV@Ft-RGD и RV@Ft-RGD + RGD (0, 10, 20, 30, 40 мкг/мл RV-эквивалентов) обрабатывали клетки A549. После 24-часовой инкубации жизнеспособность клеток анализировали тестом CCK-8. Одновременно эти клетки двойно окрашивали набором для определения аоптоза (Annexin V-FITC/PI) и анализировали FCM.

Время циркуляции RV@Ft-RGD в крови

Свободный RV или RV@Ft-RGD (6 мг/кг RV-эквивалент) внутривенно вводили здоровым бальб/с нуди мышам (n=5 на группу). После инъекции венозная кровь собирали в разные временные точки в пробирки с гепарином, затем плазму отделяли. Концентрация RV в плазме экстрагировали кислотизированным изопропаноловым реагентом, затем абсорбцию при 306 нм измеряли для определения концентрации RV.

Животная модель и in vivo химиотерапия опухолей

Бальб/с мыши (4–6 недель) приобрели у Charles River Laboratories (Пекин, Китай). Все операции с животными строго соответствовали руководству по уходу и использованию лабораторных животных, одобренному Комитетом по уходу и использованию животных Чжэньчжоу университета. Для создания подкожной опухолевой модели A549, 2×10⁶ клеток A549 вводили подкожно в спину мышей. Затем держали в вивариуме 7–9 дней. Формула объема опухоли: длина × ширина²/2.

Мыши с опухолями A549 случайно делили на пять групп по 5 мышей. Группы: контроль (физраствор), RV, RV@Ft, RV@Ft-RGD. В начале лечения препарат вводили внутривенно через хвостовую вену один раз в день в течение трех последовательных дней. Объем опухоли и масса тела записывали каждые 5 дней. Через 45 дней лечения опухоли каждой группы собирали. Ткани опухоли фиксировали в 10% формалине, делали срезы и подвергали гемоксилино-эозиновому (H&E) окрашиванию.

In vivo биокомпатибильность

200 мкл RV@Ft-RGD вводили здоровым бальб/с мышам через хвостовую вену (доза RV 15 мг/кг). Здоровые мыши, получившие физраствор тем же способом, служили контрольной группой. На 0, 10 и 45 день после инъекции кровь собирали для оценки клеточных счетов: лейкоциты (WBC), эритроциты (RBC), гемоглобин (HGB), средний тромбоцитарный объем (MPV), средний эритроцитарный гемоглобин (MCH), гематокрит (HCT), средняя концентрация гемоглобина в эритроците (MCHC), средний объем эритроцита (MCV), тромбоциты (PLT). Кроме того, ткани сердца, печени, селезенки, легких и почек каждой группы собирали на 45-й день для H&E окраски.

Статистический анализ

Данные представлены как среднее ± стандартное отклонение (s.d.). Статистический анализ выполняли Стьюдентов t-тестом, p < 0,05 считался статистически значимым.

Результаты и обсуждение

Синтез и характеризация RV@Ft-RGD

Загрузка и освобождение RV из RV@Ft-RGD проводились через pH-индуцированную реверсибльную дисассамблею и реассамблею Ft (рис. 1). Во-первых, ферритин конюгировали с опухолевым таргетирующим пептидом RGD, образуя Ft-RGD. Затем перерастворяли в ацетатном буфере (pH = 5) для дисассемблирования полипептидных подединиц и образования полой пористой сферы. Молекулы RV затем добавляли и позволяли проникнуть в полость, после чего pH медленно поднимали до ≈7,4 для реассамблеи Ft, замыкая RV внутри герметичной полости Ft. Когда pH буфера затем снижали до ~5, поры наночастиц реверсибно открывались и высвобождали RV. Рис. 2a и доп. файл 1: рис. S1 показывают SEM и TEM изображения собранных RV@Ft-RGD, демонстрирующие сферическую структуру. По DLS, частицы RV@Ft-RGD имели большие диаметры (~22,5 нм) по сравнению с исходными наночастицами Ft (~11,8 нм) (рис. 2b) и похожие дзета-потенциалы (−29,6 мВ) (рис. 2c). Через 20 дней полидисперсность (PDI) RV@Ft-RGD в воде, FBS, клеточной среде и PBS не менялась значительно (рис. 2d), указывая на замечательную коллоидную стабильность. Рис. 2e показывает спектры поглощения свободного RV, Ft-RGD и RV@Ft-RGD. Видно, что по сравнению с RV и Ft-RGD, спектр RV@Ft-RGD демонстрирует новый пик при 306 нм (от RV), подтверждая успешную загрузку. Кроме того, RV@Ft-RGD показывал похожую значимую флуоресценцию как свободный RV при 400 нм при возбуждении 325 нм лазером (рис. 2f).

Загрузка и освобождение лекарства

Максимальная загрузочная способность Ft-RGD составила 252,6%, вероятно, из-за большой полости внутри полой Ft-RGD. Благодаря pH-чувствительности Ft, мы характеризовали загрузочную способность RV при разных pH. Как показано на рис. 3a, с повышением pH от 5,0 до 8,5 эффективность загрузки RV резко падала. Освобождение RV из комплекса также характеризовали при разных pH от 5,0 до 8,5. pH- и время-зависимый профиль освобождения RV построен на этих данных и показан на рис. 3b. Максимальное соотношение освобождения лекарства (51,6%) происходило при pH = 5,0 за 24 часа, что было выше, чем при pH = 6,5, 7,4 и 8,5. Согласно литературе, pH 5,0, 6,5 и 7,4 типичны для клеточных лизосом, опухолевых тканей, крови и нормальной физиологической среды соответственно. В физиологических условиях (pH 7,4) содержание RV в RV@Ft-RGD оставалось высоким даже через 50 часов (рис. 3c), что указывает на стабильность RV в RV@Ft-RGD и отсутствие легкой утечки. Кроме того, исследовали изменение диаметра RV@Ft-RGD при нескольких pH. После инкубации при 37 °C в течение 12 часов DLS показал, что диаметр RV@Ft-RGD почти не менялся, около 23 нм при pH 8,5 и 7,4. При снижении pH до 6,5 и 5,0 диаметр увеличивался до 25 нм и 28,6 нм соответственно (рис. 3d). Эти результаты подтверждают поведение pH-индуцированной реверсибльной дисассамблеи и реассамблеи RV@Ft-RGD, что полезно для контролируемой загрузки in vitro и освобождения в опухолевой ткани.

In vitro клеточная адсорбция и локализация

In vitro клеточная адсорбция и локализация RV@Ft-RGD затем оценивали. Во-первых, RV@Ft и RV@Ft-RGD маркировали FITC через водородную связь и физическое адсорбци. Как показано на рис. 4a, клетки, обработанные свободным FITC, показали пренебрежимые цитоплазматические флуоресцентные сигналы. Клетки, обработанные RV@Ft-RGD, напротив, демонстрировали интенсивную зеленую флуоресценцию FITC, более высокую, чем у клеток с RV@Ft. Особенно, клетки, обработанные RV@Ft-RGD и предварительно обработанные RGD, обе показывали низкую зеленую флуоресценцию. Из этих результатов можно заключить, что RV@Ft-RGD адсорбировался клетками в больших количествах, вероятно, через RGD-опосредованный активный таргетирующий эффект. Эти клетки также анализировали FCM, результаты показаны на рис. 4b. Статистические результаты интенсивности клеточной флуоресценции указывают на аналогичный вывод.

Для изучения органелльной локализации RV@Ft-RGD использовали лизосомно-специфический краситель (Lyso Tracker Red) для окраски клеток, инкубированных с наночастицами. Как видно на рис. 4a, цитоплазма показывала сильную красную флуоресценцию во всех группах. После слияния с зеленой флуоресценцией FITC, RV@Ft-RGD демонстрировал наиболее интенсивную желтую (зеленую + красную) флуоресценцию в цитоплазме среди групп. Статистическим анализом группа RV@Ft-RGD имела наивысший коэффициент колокализации между флуоресценцией FITC и Lyso Tracker Red (рис. 4c). Эти результаты указывают на то, что RV@Ft-RGD может активно входить в клетки и затем переноситься в кислую среду лизосомы (pH ≈ 5,0). Эти достоинства, вместе с pH-реагирующим освобождением лекарства, наделяют RV@Ft-RGD множеством потенциальных применений для in vivo терапии опухолей.

In vitro биокомпатибильность и терапия опухолей

Перед изучением антиопухолевых свойств RV@Ft-RGD, цитотоксичность носителя Ft-RGD исследовали. Как показано на рис. 5a и доп. файлы 1: рис. S2 и S3, Ft-RGD не подавлял жизнеспособность клеток рака легкого A549 и NCI-H358 при концентрациях до 1 мг/мл. Морфология клеток также не показывала значительных изменений при сравнении клеток, обработанных 1 мг/мл, с контрольными группами (рис. 5b), четко указывая на то, что Ft-RGD как носитель обладает отличной биокомпатибильностью. Как показано на рис. 6a, b, свободный RV, RV@Ft и RV@Ft-RGD все убивают клетки доза-зависимым образом. Клетки, обработанные RV@Ft-RGD, показывали больший спад жизнеспособности и имели только 11,2% жизнеспособности в группе 40 мкг/мл, что было ниже, чем у групп RV@Ft и RV@Ft-RGD + RGD предварительно обработанных. Предварительное исследование FCM дополнительно выявило, что при RV, RV@Ft или RV@Ft-RGD большинство клеточных смертей опосредовывалось аоптозом (рис. 6c). Эти результаты демонстрируют, что опухолевой эффект RV был 크게 усилен загрузкой в Ft-RGD, главным образом из-за увеличенного накопления RV@Ft-RGD в лизосоме, где кислый pH триггерил усиленное высвобождение аоптоз-промоувирующего RV в цитоплазму.

Период полувыведения RV@Ft-RGD в крови

Концентрацию RV в плазме крови в разные моменты после инъекции изучали для свободного RV и групп RV@Ft-RGD. Как показано на рис. 7a, период полувыведения RV@Ft-RGD в крови составил 5,1 ± 0,23 ч. Свободный RV быстрее вымывался из кровотока, с периодом полувыведения всего 0,43 ± 0,11 ч. Значительно удлиненный период полувыведения RV@Ft-RGD в крови благоприятен для улучшения удержания препарата в системном кровотоке и фасилитирует накопление препарата в опухолевых узлах.

In vivo антиопухолевой эффект и системная токсичность RV@Ft-RGD

Рис. 7b показывает профиль роста опухолей у мышей-носителей с разным лечением, выраженный как относительный объем опухоли. Рост опухоли был подавлен в некоторой степени при лечении RV@Ft, вероятно, из-за низкой адсорбции RV@Ft. Однако в группе, леченной RV@Ft-RGD, рост опухоли был значительно подавлен по сравнению с другими группами (контроль, RV, RV@Ft, RV@Ft-RGD + RGD). Во время лечения не наблюдалось заметной потери массы тела в любой экспериментальной группе (рис. 7c), указывая на высокую биобезопасность RV@Ft-RGD. После окончания курса лечения H&E окраска ткани опухоли в этих группах проводилась для исследования химиотерапевтических эффектов. Как показано на рис. 7d, большая площадь аоптоза наблюдалась в опухолях, леченных RV@Ft-RGD, что в значительном контрасте с только небольшой площадью аоптоза в опухолях, леченных свободным RV, RV@Ft и RV@Ft-RGD + RGD. Кроме того, системная токсичность RV@Ft-RGD также оценивалась на нормальных мышах. Образцы всей крови физраствора и RV@Ft-RGD-обработанных здоровых мышей собирали на 0, 10 и 45 день после инъекции для анализа крови. Как показано на рис. 8a, b, полные кровные счета (WBC, RBC, HGB, MPV, MCH, HCT, MCV, PLT, MCHC) мышей, инъецированных RV@Ft-RGD, не показывали значительных различий с 0 до 45 дней. Основные органы здоровых мышей, обработанных физраствором и RV@Ft-RGD, также собирали на 45-й день для H&E окраски. Никаких очевидных побочных эффектов в этих тканях не обнаруживали (рис. 8c), что указывает на пренебрежимую долгосрочную неблагоприятную токсичность. Все эти результаты демонстрируют перспективный потенциал RV@Ft-RGD для усиленной химиотерапии рака in vivo.

Заключение

В заключение, мы успешно разработали pH-индуцированную реверсибельную систему сборки (PIRAS) с pH-контролируемой загрузкой и освобождением антиопухолевого препарата RV для усиленной таргетированной химиотерапии опухолей. В кислой среде (pH = 5,0) система может дисассемблироваться и загружать или высвобождать RV, в то время как в нейтральной среде (pH = 7,4) RV@Ft-RGD высоко стабилен и показывает пренебрежимую утечку препарата. Благодаря RGD-опосредованному таргетирующему эффекту, RV@Ft-RGD может адсорбироваться в высоких концентрациях клетками A549 и накапливаться в лизосоме, что благоприятно для высвобождения RV как in vitro, так и in vivo. Из-за накопления RV@Ft-RGD в лизосоме и pH-триггерируемого высвобождения RV кислой лизосомой в цитоплазму, RV@Ft-RGD проявил отличные эффекты убийства опухолевых клеток и промоувирования аоптоза по сравнению со свободным RV. Кроме того, после загрузки RV в Ft-RGD, RV@Ft-RGD показал гораздо более длинный период полувыведения в крови, чем свободный RV. In vivo результаты демонстрируют, что RV@Ft-RGD показывает замечательное подавление опухоли и никакой заметной системной токсичности. Это исследование предполагает, что Ft-базированная PIRAS высокоэффективна в загрузке и высвобождении препарата для усиленной антиопухолевой терапии.

Доступность данных и материалов

Выводы, сделанные в этом манускрипте, основаны на данных, которые все представлены и показаны в этой статье.

Аббревиатуры

BSA:

Бычий сывороточный альбумин

CCK-8:

Набор для подсчета клеток-8

DLS:

Динамическое световое рассеяние

EDC:

1-Этил-3-(3-диметиламинопропильный)карбодиимид

FBS:

Фетовый бычий сывороточный альбумин

FITC:

Флуоресцеин изотиоцианат

Ft:

Ферритин

HCT:

Гематокрит

HGB:

Гемоглобин

MCH:

Средний эритроцитарный гемоглобин

MCHC:

Средняя концентрация гемоглобина в эритроците

MCV:

Средний объем эритроцита

MPV:

Средний тромбоцитарный объем

NHS:

N-гидрокси숙цинимид

PIRAS:

pH-индуцированная реверсибельная система сборки

PLT:

Тромбоциты

RBC:

Эритроциты

RGD:

Arg-Gly-Asp

RV:

Ресвератрол

WBC:

Лейкоциты